I den differentielle bestemmelse af enterobakterier og nogle vibrioer indtager Voges-Proskauer-reaktionen en særlig plads. Testen er baseret på bakteriers evne til at fermentere glucose til dannelse af acetoin.
essensen af forskningsprocessen
I mikrobiologi bruges Voges-Proskauer-reaktionen ofte til at differentiere inden for Yersinia-familien af enterobakterier (inklusive patogenerne af pseudotuberculosis og enterocolitis), Escherichia coli og sporedannende aerober. Resultatet visualiseres ved at farve mediet, når visse reagenser tilsættes.
Denne test tilhører IMViC-serien (forkortelse af Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - en gruppe af identifikationstests inklusive differentialdefinitioner:
- med indol, baseret på nedbrydning af tryptofan til indol, brugt i nærværelse af et Kovacs- eller Ehrlich-reagens;
- brugermethylroth eller methylrødt, som detekterer en given pH som følge af glukosemetabolisering;
- Voges-Proskauer-reaktioner til påvisning af acetyl-methylcarbinol;
- udnyttelse af citrat med farveændring som følge af alkalisering af mediet.
Essensen af processen er visualiseringen af tilstedeværelsen af diagnosticerede bakterier på grund af interaktionen af acetoin dannet af dem med kaustisk kaliumchlorid i nærvær af oxygen. Acetyl-methylcarbinol oxideres til diacetyl, som danner en lys rød eller lyserød forbindelse. Øg testens følsomhed ved at indføre alfa-naphthol, før du tilsætter kaustisk kaliumchlorid.
Testindstilling
Formuleringen af Voges-Proskauer-reaktionen involverer den foreløbige dyrkning af mikroorganismer. En ren kultur sås på Clarks differentialdiagnostiske medium, hvoraf en variation er Clarks bouillon (uden tilsætning af agar-agar). Enten anvendes færdiglavet medium eller fremstilles uafhængigt. Ingredienser inkluderer:
- 5g pepton;
- 5g glukose;
- 5g dibasisk kaliumphosphat;
- 1L destillat.
Under undersøgelsen inokuleres kulturen med en steril bakteriologisk løkke i et flydende medium. Mængde - 5 ml i et reagensglas plus kontrol. Inkubation udføres ved en temperatur på 35-37 grader i to dage. Dernæst udføres en undersøgelse af Voges-Proskauer-reaktionen i etaper:
- 2, 5 ml bouillonkultur overføres til et sterilt rør.
- Tilføj seks dråber alfa-naphthol (5 % alkoholopløsning).
- Tilføj 40 %en opløsning af kaustisk kalium i en mængde på 0,1 ml eller to dråber.
- Omrøring udføres ved forsigtigt at ryste reagensglasset.
- Vurder resultatet efter 15 minutter fra starten af eksperimentet.
En alternativ testmetode er inkubation natten over, hvis varighed reduceres til 18 timer eller op til en dag. Ud over denne metode anvendes også en eksprestest: en kultur indføres i en sløjfe i 2 ml af mediet, inkuberes i ca. fire timer, derefter tilsættes reagenser i en lige mængde på 2-3 dråber, blandes og resultatet evalueres efter ti minutter.
Bekæmpelsen er en af de forårsagende stoffer til lungebetændelse Klebsiella pneumoniae - stamme atcc 13883.
Evaluering af resultatet
Efter den påkrævede tid efter tilsætning af reagenserne (fra 5 til 15 minutter), bør en kirsebærrød farve observeres med en udt alt positiv reaktion, rød og pink - med en svag positiv reaktion. Ingen ændring registreres som et negativt resultat.
Overskud af kaustisk kaliumchlorid i en opløsning kan give en efterligning af en positiv reaktion, farvning i en kobberfarve. I dette tilfælde skal det negative svar fra den testede koloni registreres. Kobberfarvning forekommer også i tilfælde, hvor vurderingen gives en time efter introduktionen af reagenserne.
Ved evaluering af resultatet skal det tages i betragtning, at langvarig dyrkning af de undersøgte mikroorganismer (mere end tre dage) fører til forsuring af mediet, hvilket kan føre til et forkert resultat af undersøgelsen. Reaktionen kan være mildt positiv ellerfalsk negativ.
Krav til testreagenser
Voges-Proskauer-reagenser skal opfylde krav som korrekt koncentration, høj renhed og stabilitet, hvilket opnås gennem korrekt opbevaring.
Klar-til-brug testsæt indeholder typisk reagenser til 100 eller flere anvendelser og kommer i hætteglas af plast eller tonede glas. Kvaliteten er reguleret af den relevante dokumentation.
